<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE article PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.3 20210610//EN" "JATS-journalpublishing1-3.dtd">
<article article-type="research-article" dtd-version="1.3" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" xml:lang="ru"><front><journal-meta><journal-id journal-id-type="publisher-id">fcmedicine</journal-id><journal-title-group><journal-title xml:lang="ru">Фундаментальная и клиническая медицина</journal-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>Fundamental and Clinical Medicine</trans-title></trans-title-group></journal-title-group><issn pub-type="ppub">2500-0764</issn><issn pub-type="epub">2542-0941</issn><publisher><publisher-name>КемГМУ</publisher-name></publisher></journal-meta><article-meta><article-id custom-type="elpub" pub-id-type="custom">fcmedicine-125</article-id><article-categories><subj-group subj-group-type="heading"><subject>Research Article</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="ru"><subject>Статьи</subject></subj-group></article-categories><title-group><article-title>ИССЛЕДОВАНИЕ НОРМАЛЬНОЙ И ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ МИКРОСКОПИЧЕСКОЙ АНАТОМИИ КРОВЕНОСНЫХ СОСУДОВ ПРИ ПОМОЩИ СКАНИРУЮЩЕЙ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ В ОБРАТНО-РАССЕЯННЫХ ЭЛЕКТРОНАХ</article-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>HISTOLOGY AND HISTOPATHOLOGY OF BLOOD VESSELS: BACKSCATTERED SCANNING ELECTRON MICROSCOPY APPROACH</trans-title></trans-title-group></title-group><contrib-group><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Мухамадияров</surname><given-names>Р. А.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Mukhamadiyarov</surname><given-names>RINAT A.</given-names></name></name-alternatives><email xlink:type="simple">noemail@neicon.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Кутихин</surname><given-names>А. Г.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Kutikhin</surname><given-names>ANTON G.</given-names></name></name-alternatives><email xlink:type="simple">noemail@neicon.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib></contrib-group><aff-alternatives id="aff-1"><aff xml:lang="ru"><institution>ФГБНУ «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний»</institution><country>Россия</country></aff><aff xml:lang="en"><institution>Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases</institution><country>Russian Federation</country></aff></aff-alternatives><pub-date pub-type="collection"><year>2019</year></pub-date><pub-date pub-type="epub"><day>30</day><month>03</month><year>2019</year></pub-date><volume>4</volume><issue>1</issue><fpage>6</fpage><lpage>14</lpage><permissions><copyright-statement>Copyright &amp;#x00A9; Мухамадияров Р.А., Кутихин А.Г., 2019</copyright-statement><copyright-year>2019</copyright-year><copyright-holder xml:lang="ru">Мухамадияров Р.А., Кутихин А.Г.</copyright-holder><copyright-holder xml:lang="en">Mukhamadiyarov R.A., Kutikhin A.G.</copyright-holder><license xml:lang="ru" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.</license-p></license><license xml:lang="en" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.</license-p></license></permissions><self-uri xlink:href="https://fcm.kemsmu.ru/jour/article/view/125">https://fcm.kemsmu.ru/jour/article/view/125</self-uri><abstract><p>Цель. Изучить возможности применения оригинального метода длительной постфиксации тканей в тетраоксиде осмия и контрастирования уранилацетатом и цитратом свинца с последующей заливкой в эпоксидную смолу для исследования гистологических и гистопатологических особенностей кровеносных сосудов. Материалы и методы. В качестве эталонных объектов исследования были выбраны аорта крысы, полученная в результате каротид-ной эндартерэктомии пораженная атеросклерозом сонная артерия человека и полученный в результате тотальной хирургической коррекции тетрады Фалло стент. После суточной фиксации в 10% забуференном формалине сосуды были контрастированы 2% тетраоксидом осмия в течение 60 часов, дегидратированы посредством воздействия спиртов возрастающей концентрации (50, 60, 70, 80 и 95%-ный эта-нол, 99,7% изопропанол, ацетон), пропитаны смесью ацетона с эпоксидной смолой Epon-Araldite в соотношении 1:1 и заключены в вышеуказанную эпоксидную смолу с последующей шлифовкой и полировкой полимеризован-ных эпоксидных блоков. Контрастирование 2% уранилацетатом осуществляли во время проводки в 95% этаноле, контрастирование цитратом свинца по Рейнольдсу выполняли путем нанесения на поверхность шлифованного образца с последующей отмывкой. Далее проводилось напыление эпоксидных блоков углеродом и собственно визуализация образцов при помощи сканирующей электронной микроскопии в обратно-рассеянных электронах.Результаты. Вышеописанная методика позволила обеспечить сохранность гистоархитектоники (интиму, медию, адвентицию и периваскулярную жировую ткань) и визуализировать с увеличением до пяти тысяч раз все основные структуры внутри сосудов (эндотелиальные клетки, эластические волокна, слои гладкомышечных клеток, фибробласты, клетки периваскулярной жировой ткани, vasa vasorum, лимфоидные фолликулы). Кроме того, с ее помощью оказалось возможным дифференцировать даже малокалиберные vasa vasorum от лимфоидных фол-ликулов. Это существенно расширяет возможности визуализации в сравнении с классической заливкой в парафин, рутинным окрашиванием и световой микроскопией (позволяющей добиться увеличения не более чем в четыреста раз, что не позволяет провести количественный анализ vasa vasorum и лимфоидных фолликулов). Кроме того, в отличие от стандартного подхода, данная методика позволяет проводить полноценный анализ тканей, содержащих цельнометаллические имплантаты или массивные кальцификаты.Заключение. Описанная методика может быть предложена для апробации в функциональных исследованиях по оценке физиологической и патологической неоваскуляризации, а также активации воспаления в адвентиции и периваскулярной жировой ткани.</p></abstract><trans-abstract xml:lang="en"><p>Aim. To study the technical possibility of em-ploying the original technique of long-term osmium tetroxide postfixation and uranyl acetate/lead citrate counterstaining with the following embedding into epoxy resin for the investigation of histological and histopathological features of the blood vessels. Materials and Methods. The study was carried out on rat abdominal aorta, carotid atherosclerot-ic plaque excised during endarterectomy, and stent excised during total surgical correction of Fallot’s tetralogy. After the 24-hour fixation in 10% neutral phosphate buffered formalin, samples were stained with 2% osmium tetroxide for 60 hours, dehydrated in ascending ethanol series (50, 60, 70, 80, and 95% ethanol, 99,7% isopropanol, acetone), impregnated into acetone : epoxy resin (Epon-Araldite, 1:1), and embedded into fresh epoxy res-in with the following grinding and polishing of polymerised epoxy resin blocks. Counterstain-ing with 2% uranyl acetate was performed during the incubation in 95% ethanol while counterstain-ing with Reynolds’ lead citrate was conducted af-ter the grinding. Samples were then sputter coated with carbon and were finally visualised by back-scattered scanning electron microscopy.Results. Our technique retained integrity of the blood vessels, preserving all vascular layers (intima, media, adventitia, and perivascular adipose tissue) and allowed visualisation of all vessel structures (endothelial cells, elastic fibers, smooth muscle cell layers, fibroblasts, perivascular adipose tissue cells, vasa vasorum, and lymphoid follicles) at x5000 magnification. In addition, it was possible to differentiate even small caliber vasa vasorum from lymphoid follicles. The developed technique considerably ex-pands quality of visualization as compared to the conventional approach (paraffin embedding, routine histological staining, and light microscopy) with a limited magnification not permit-ting quantitative analysis of vasa vasorum and lymphoid follicles. Further, it makes possible to analyse tissues containing metal implants or large amounts of calcified tissue without their disintegration.Conclusions. Out technique may be suggested for the evaluation of physiological and pathological neovascularisation and assessment of adventitial and perivascular inflammation.</p></trans-abstract><kwd-group xml:lang="ru"><kwd>аорта</kwd><kwd>стенты</kwd><kwd>эпоксидная смола</kwd><kwd>vasa vasorum</kwd><kwd>неоваскуляризация</kwd><kwd>aorta</kwd><kwd>stents</kwd><kwd>epoxy resin</kwd><kwd>vasa vasorum</kwd><kwd>neovascularization</kwd></kwd-group></article-meta></front><back><ref-list><title>References</title><ref id="cit1"><label>1</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Timmermans FJ, Otto C. Contributed review: Review of integrated correlative light and electron microscopy. Rev Sci Instrum. 2015; 86 (1): 011501. doi: 10.1063/1.4905434</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Timmermans FJ, Otto C. Contributed review: Review of integrated correlative light and electron microscopy. Rev Sci Instrum. 2015; 86 (1): 011501. doi: 10.1063/1.4905434</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit2"><label>2</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Combs CA, Shroff H. Fluorescence Microscopy: A Concise Guide to Current Imaging Methods. Curr Protoc Neurosci. 2017; 79: 2.1.1-2.1.25. doi: 10.1002/cpns.29</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Combs CA, Shroff H. Fluorescence Microscopy: A Concise Guide to Current Imaging Methods. Curr Protoc Neurosci. 2017; 79: 2.1.1-2.1.25. doi: 10.1002/cpns.29</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit3"><label>3</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Ryan J, Gerhold AR, Boudreau V, Smith L, Maddox PS. Introduction to Modern Methods in Light Microscopy. Methods Mol Biol. 2017; 1563: 1-15. doi: 10.1007/978-1-4939-6810-7_1</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Ryan J, Gerhold AR, Boudreau V, Smith L, Maddox PS. Introduction to Modern Methods in Light Microscopy. Methods Mol Biol. 2017; 1563: 1-15. doi: 10.1007/978-1-4939-6810-7_1</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit4"><label>4</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Mukhamadiyarov RA, Sevostyanova VV, Shishkova DK, Nokhrin AV, Sidorova OD, Kutikhin AG. Grinding and polishing instead of sectioning for the tissue samples with a graft: Implications for light and electron microscopy. Micron. 2016; 85: 1-7. doi: 10.1016/j.micron.2016.03.005</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Mukhamadiyarov RA, Sevostyanova VV, Shishkova DK, Nokhrin AV, Sidorova OD, Kutikhin AG. Grinding and polishing instead of sectioning for the tissue samples with a graft: Implications for light and electron microscopy. Micron. 2016; 85: 1-7. doi: 10.1016/j.micron.2016.03.005</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit5"><label>5</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Лотков А.И., Матвеева В.Г., Антонова Л.В., Кашин О.А., Кудряшов А.Н. Основные направления модификации поверхности металлических эндоваскулярных стентов в решении проблемы рестенозов (обзор 1 часть) // Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2017. Т. 6. № 1. С. 122-130). doi: 10.17802/2306-1278-2017-1-122-130</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Лотков А.И., Матвеева В.Г., Антонова Л.В., Кашин О.А., Кудряшов А.Н. Основные направления модификации поверхности металлических эндоваскулярных стентов в решении проблемы рестенозов (обзор 1 часть) // Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2017. Т. 6. № 1. С. 122-130). doi: 10.17802/2306-1278-2017-1-122-130</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit6"><label>6</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Лотков А.И., Матвеева В.Г., Антонова Л.В., Кашин О.А., Кудря-шов А.Н. Основные направления модификации поверхности металлических эндоваскулярных стентов в решении проблемы рестенозов (обзор 2 часть) // Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2017. Т. 6. № 3. С. 131-142). doi: 10.17802/2306-1278-2017-6-3-131-142</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Лотков А.И., Матвеева В.Г., Антонова Л.В., Кашин О.А., Кудря-шов А.Н. Основные направления модификации поверхности металлических эндоваскулярных стентов в решении проблемы рестенозов (обзор 2 часть) // Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2017. Т. 6. № 3. С. 131-142). doi: 10.17802/2306-1278-2017-6-3-131-142</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit7"><label>7</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Pereira T, Betriu A, Alves R. Non-invasive imaging techniques and assessment of carotid vasa vasorum neovascularization: Promises and pitfalls. Trends Cardiovasc Med. 2019; 29 (2): 71-80. doi: 10.1016/j.tcm.2018.06.007</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Pereira T, Betriu A, Alves R. Non-invasive imaging techniques and assessment of carotid vasa vasorum neovascularization: Promises and pitfalls. Trends Cardiovasc Med. 2019; 29 (2): 71-80. doi: 10.1016/j.tcm.2018.06.007</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit8"><label>8</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Шишкова Д.К., Великанова Е.А., Кривкина Е.О., Миронов А.В., Кудрявцева Ю.А., Кутихин А.Г. Токсическое действие кальций-фосфатных бионов на адвентицию брюшной аорты крыс // Атеросклероз и дислипидемии. 2018. № 3 (32). С. 37-43</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Шишкова Д.К., Великанова Е.А., Кривкина Е.О., Миронов А.В., Кудрявцева Ю.А., Кутихин А.Г. Токсическое действие кальций-фосфатных бионов на адвентицию брюшной аорты крыс // Атеросклероз и дислипидемии. 2018. № 3 (32). С. 37-43</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit9"><label>9</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Sander B, Golas MM. Visualization of bionanostructures using transmission electron microscopical techniques. Microsc Res Tech. 2011; 74 (7): 642-663. doi: 10.1002/jemt.20963</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Sander B, Golas MM. Visualization of bionanostructures using transmission electron microscopical techniques. Microsc Res Tech. 2011; 74 (7): 642-663. doi: 10.1002/jemt.20963</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit10"><label>10</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Jensen E. Technical review: colocalization of antibodies using confocal microscopy. Anat Rec (Hoboken). 2014; 297 (2): 183-187. doi: 10.1002/ar.22835</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Jensen E. Technical review: colocalization of antibodies using confocal microscopy. Anat Rec (Hoboken). 2014; 297 (2): 183-187. doi: 10.1002/ar.22835</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit11"><label>11</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Galis ZS, Lessner SM. Will the real plaque vasculature please stand up? Why we need to distinguish the vasa plaquorum from the vasa vasorum. Trends Cardiovasc Med. 2009; 19 (3): 87-94. doi: 10.1016/j.tcm.2009.06.001</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Galis ZS, Lessner SM. Will the real plaque vasculature please stand up? Why we need to distinguish the vasa plaquorum from the vasa vasorum. Trends Cardiovasc Med. 2009; 19 (3): 87-94. doi: 10.1016/j.tcm.2009.06.001</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit12"><label>12</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Akhavanpoor M, Wangler S, Gleissner CA, Korosoglou G, Katus HA, Erbel C. Adventitial inammation and its interaction with intimal atherosclerotic lesions. Front Physiol. 2014; 5: 296. doi: 10.3389/fphys.2014.00296</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Akhavanpoor M, Wangler S, Gleissner CA, Korosoglou G, Katus HA, Erbel C. Adventitial inammation and its interaction with intimal atherosclerotic lesions. Front Physiol. 2014; 5: 296. doi: 10.3389/fphys.2014.00296</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit13"><label>13</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Nosalski R, Guzik TJ. Perivascular adipose tissue inflammation in vascular disease. Br J Pharmacol. 2017; 174 (20): 3496-3513. doi: 10.1111/bph.13705</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Nosalski R, Guzik TJ. Perivascular adipose tissue inflammation in vascular disease. Br J Pharmacol. 2017; 174 (20): 3496-3513. doi: 10.1111/bph.13705</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit14"><label>14</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th edition. Washington (DC): National Academies Press (US); 2011</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th edition. Washington (DC): National Academies Press (US); 2011</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit15"><label>15</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Нохрин А.В., Тарасов Р.С., Мухамадияров Р.А., Барбараш Л.С. Этапный подход: стентирование выводного отдела правого желудочка с последующей радикальной коррекцией тетрады Фалло у маловесных детей - непосредственные и отдаленные результаты // Детские болезни сердца и сосудов. 2017. Т. 14. № 2. С. 90-100</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Нохрин А.В., Тарасов Р.С., Мухамадияров Р.А., Барбараш Л.С. Этапный подход: стентирование выводного отдела правого желудочка с последующей радикальной коррекцией тетрады Фалло у маловесных детей - непосредственные и отдаленные результаты // Детские болезни сердца и сосудов. 2017. Т. 14. № 2. С. 90-100</mixed-citation></citation-alternatives></ref></ref-list><fn-group><fn fn-type="conflict"><p>The authors declare that there are no conflicts of interest present.</p></fn></fn-group></back></article>
