<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE article PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.3 20210610//EN" "JATS-journalpublishing1-3.dtd">
<article article-type="research-article" dtd-version="1.3" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" xml:lang="ru"><front><journal-meta><journal-id journal-id-type="publisher-id">fcmedicine</journal-id><journal-title-group><journal-title xml:lang="ru">Фундаментальная и клиническая медицина</journal-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>Fundamental and Clinical Medicine</trans-title></trans-title-group></journal-title-group><issn pub-type="ppub">2500-0764</issn><issn pub-type="epub">2542-0941</issn><publisher><publisher-name>КемГМУ</publisher-name></publisher></journal-meta><article-meta><article-id pub-id-type="doi">10.23946/2500-0764-2024-9-2-20-27</article-id><article-id custom-type="elpub" pub-id-type="custom">fcmedicine-860</article-id><article-categories><subj-group subj-group-type="heading"><subject>Research Article</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="ru"><subject>ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="en"><subject>ORIGINAL RESEARCH</subject></subj-group></article-categories><title-group><article-title>Оценка цитотоксичности полимерных матриксов, пригодных для изготовления сосудистых протезов малого диаметра</article-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>Cytotoxicity of Polymer Scaffolds Suitable for Manufacturing of Small-Diameter Vascular Grafts</trans-title></trans-title-group></title-group><contrib-group><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-1079-1956</contrib-id><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Великанова</surname><given-names>Е. А.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Velikanova</surname><given-names>E. A.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>Великанова Елена Анатольевна, кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории клеточных технологий</p><p>650002, г. Кемерово, бульвар имени академика Л.С. Барбараша, д. 6</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Dr. Elena A. Velikanova, PhD, Researcher, Laboratory of Cell and Tissue Engineering</p><p>6, Barbarash Boulevard, Kemerovo, 650002</p></bio><email xlink:type="simple">velikanova_ea@mail.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-9430-937X</contrib-id><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Сенокосова</surname><given-names>Е. А.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Senokosova</surname><given-names>E. A.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>Сенокосова Евгения Андреевна, кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории клеточных технологий</p><p>650002, г. Кемерово, бульвар имени академика Л.С. Барбараша, д. 6</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Dr. Evgenia A. Senokosova, PhD, Researcher, Laboratory of Cell and Tissue Engineering</p><p>6, Barbarash Boulevard, Kemerovo, 650002</p></bio><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0003-4890-0393</contrib-id><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Глушкова</surname><given-names>Т. В.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Glushkova</surname><given-names>T. V.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>Глушкова Татьяна Владимировна, кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории клеточных технологий</p><p>650002, г. Кемерово, бульвар имени академика Л.С. Барбараша, д. 6</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Dr. Tatiana V. Glushkova, PhD, Senior Researcher, Laboratory of Cell and Tissue Engineering</p><p>6, Barbarash Boulevard, Kemerovo, 650002</p></bio><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-2500-2147</contrib-id><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Кривкина</surname><given-names>Е. О.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Krivkina</surname><given-names>E. O.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>Кривкина Евгения Олеговна, младший научный сотрудник лаборатории клеточных технологий</p><p>650002, г. Кемерово, бульвар имени академика Л.С. Барбараша, д. 6</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Ms. Evgenia O. Krivkina, MSc, Junior Researcher, Laboratory of Cell and Tissue Engineering</p><p>6, Barbarash Boulevard, Kemerovo, 650002</p></bio><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-8874-0788</contrib-id><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Антонова</surname><given-names>Л. В.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Antonova</surname><given-names>L. V.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>Антонова Лариса Валерьевна, доктор медицинских наук, заведующая лабораторией клеточных технологий</p><p>650002, г. Кемерово, бульвар имени академика Л.С. Барбараша, д. 6</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Dr. Larisa V. Antonova, MD, DSc, Head of the Laboratory of Cell and Tissue Engineering</p><p>6, Barbarash Boulevard, Kemerovo, 650002 </p></bio><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib></contrib-group><aff-alternatives id="aff-1"><aff xml:lang="ru"><institution>ФГБНУ «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний»</institution><country>Россия</country></aff><aff xml:lang="en"><institution>Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases</institution><country>Russian Federation</country></aff></aff-alternatives><pub-date pub-type="collection"><year>2024</year></pub-date><pub-date pub-type="epub"><day>20</day><month>06</month><year>2024</year></pub-date><volume>9</volume><issue>2</issue><fpage>20</fpage><lpage>27</lpage><permissions><copyright-statement>Copyright &amp;#x00A9; Великанова Е.А., Сенокосова Е.А., Глушкова Т.В., Кривкина Е.О., Антонова Л.В., 2024</copyright-statement><copyright-year>2024</copyright-year><copyright-holder xml:lang="ru">Великанова Е.А., Сенокосова Е.А., Глушкова Т.В., Кривкина Е.О., Антонова Л.В.</copyright-holder><copyright-holder xml:lang="en">Velikanova E.A., Senokosova E.A., Glushkova T.V., Krivkina E.O., Antonova L.V.</copyright-holder><license xml:lang="ru" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.</license-p></license><license xml:lang="en" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.</license-p></license></permissions><self-uri xlink:href="https://fcm.kemsmu.ru/jour/article/view/860">https://fcm.kemsmu.ru/jour/article/view/860</self-uri><abstract><sec><title>Цель</title><p>Цель. В условиях in vitro оценить цитотоксичность матриксов из поликапролактона и полиуретана.</p></sec><sec><title>Материалы и методы</title><p>Материалы и методы. Полимерные матриксы изготавливали методом электроспиннинга из 12% раствора поли(ε-капролактона) или 12% раствора полиуретана. Для изучения структуры поверхности на образцы матриксов наносили токопроводящее Au/Pd покрытие и исследовали с помощью сканирующего электронного микроскопа. Оценку цитотоксичности образцов матриксов проводили на культуре клеток линии Ea.hy 926, клетки высевали на поверхность матриксов и культивировали в течение 3 суток. Оценивали жизнеспособность клеточной культуры методом МТТ, пролиферативную активность клеток, плотность клеточной культуры. На аппарате xCelligence клетки культивировали в присутствии исследуемых образцов матриксов, оценивали динамику роста клеточной культуры в режиме реального времени.</p></sec><sec><title>Результаты</title><p>Результаты. При анализе поверхности полимерных матриксов методом электронной микроскопии было показано, что матриксы из поликапролактона характеризуются большей вариабельностью толщины нитей и значительно большим размером пор. Нити полиуретана формируют плотное полотно с более ровной поверхностью. При проведении исследования в условиях прямого контакта клеток с материалом матриксы из PCL значительно превосходили по биосовместимости матриксы из PU практически по всем исследованным показателям. По способности поддерживать адгезию клеток на поверхности матриксы из PCL не отличались от культурального пластика, составлявшего группу контроля; также были получены высокие значения жизнедеятельности клеток в тесте МТТ. Разница в уровне пролиферации клеток между матриксами была не настолько выраженной, при этом и PCL и PU матриксы значительно отличались от контроля. При проведении анализа в условиях непрямого контакта не было получено данных о цитотоксическом действии образцов матриксов.</p></sec><sec><title>Заключение</title><p>Заключение. Матриксы из поликапролактона и полиуретана не проявляли цитотоксического действия и могут быть использованы для изготовления полимерных каркасов сосудистых протезов.</p></sec></abstract><trans-abstract xml:lang="en"><sec><title>Aim</title><p>Aim.To evaluate the cytotoxicity of poly(ε-caprolactone) and polyurethane scaffolds in vitro.</p></sec><sec><title>Materials and Methods</title><p>Materials and Methods. Polymer scaffolds were made by electrospinning from a 12% solution of poly(ε-caprolactone) or a 12% solution of polyurethane. Surface structure was examined by scanning electron microscopy, whilst cytotoxicity was evaluated by seeding EA.hy 926 endothelial cells on scaffold surface for 72 hours. Cell culture viability and proliferation was assessed by MTT assay and by quantifying cell culture density. On the xCELLigence device, cells were cultured in the presence of the studied matrix samples, and the dynamics of cell culture growth was evaluated in real time.</p></sec><sec><title>Results</title><p>Results. Poly(ε-caprolactone) scaffolds were characterised by a higher variability in the filament thickness and by a significantly larger pore size. Polyurethane filaments formed a dense web with a smoother surface. Poly(ε-caprolactone) scaffolds had significantly higher biocompatibility in comparison with polyurethane. Adhesion of cells to poly(ε-caprolactone) scaffolds did not differ from the cell culture plastic, and poly(ε-caprolactone) supported cell proliferation in the MTT test. Poly(ε-caprolactone) and polyurethane did not differ significantly in terms of inducing cell proliferation. Both poly(ε-caprolactone) and polyurethane scaffolds did not pose considerable cytotoxicity.</p></sec><sec><title>Conclusion</title><p>Conclusion. Poly(ε-caprolactone) and polyurethane scaffolds did not exhibit cytotoxic effects and can be used for manufacturing polymer scaffolds of vascular grafts.</p></sec></trans-abstract><kwd-group xml:lang="ru"><kwd>тканевая инженерия</kwd><kwd>протезы сосудов</kwd><kwd>цитотоксичность</kwd><kwd>полиуретан</kwd><kwd>поликапролактон</kwd><kwd>электроспиннинг</kwd></kwd-group><kwd-group xml:lang="en"><kwd>tissue engineering</kwd><kwd>vascular grafts</kwd><kwd>cytotoxicity</kwd><kwd>polyurethane</kwd><kwd>poly(ε-caprolactone)</kwd><kwd>electrospinning</kwd></kwd-group><funding-group><funding-statement xml:lang="ru">Результаты получены при поддержке Российской Федерации в лице Министерства науки и высшего образования РФ в рамках Соглашения о предоставлении из федерального бюджета грантов в форме субсидий от «30» сентября 2022 г. № 075-15-2022-1202, комплексной научно-технической программы полного инновационного цикла «Разработка и внедрение комплекса технологий в областях разведки и добычи твердых полезных ископаемых, обеспечения промышленной безопасности, биоремедиации, создания новых продуктов глубокой переработки из угольного сырья при последовательном снижении экологической нагрузки на окружающую среду и рисков для жизни населения» (утвержденной распоряжением Правительства Российской Федерации от 11 мая 2022 г. № 1144-р).</funding-statement><funding-statement xml:lang="en">The study was supported by the Russian Federation, specifically the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation, under the Agreement for providing grant funding in the form of subsidies from the federal budget, dated September 30, 2022, No. 075-15-2022-1202. The study is a part of a comprehensive scientific and technological program of the full innovation cycle, entitled “Development and implementation of technologies in the fields of solid mineral exploration and extraction, industrial safety, bioremediation, and the creation of new products through deep coal processing, all with a gradual reduction of environmental impact and risks to the population`s well-being”. This initiative was established by the Russian Government`s decree No. 1144-r on May 11, 2022.</funding-statement></funding-group></article-meta></front><back><ref-list><title>References</title><ref id="cit1"><label>1</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Kitsuka T., Hama R., Ulziibayar A., Matsuzaki Y., Kelly J., Shinoka T. Clinical Application for Tissue Engineering Focused on Materials. Biomedicines. 2022;10(6):1439. https://doi.org/10.3390/biomedicines10061439</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Kitsuka T, Hama R, Ulziibayar A, Matsuzaki Y, Kelly J, Shinoka T. Clinical Application for Tissue Engineering Focused on Materials. Biomedicines. 2022;10(6):1439. https://doi.org/10.3390/biomedicines10061439</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit2"><label>2</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Moore M.J., Tan R.P., Yang N., Rnjak-Kovacina J., Wise S.G. Bioengineering artificial blood vessels from natural materials. Trends Biotechnol. 2022;40(6):693-707. https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2021.11.003</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Moore MJ, Tan RP, Yang N, Rnjak-Kovacina J, Wise SG. Bioengineering artificial blood vessels from natural materials. Trends Biotechnol. 2022;40(6):693-707. https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2021.11.003</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit3"><label>3</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Pashneh-Tala S., MacNeil S., Claeyssens F. The Tissue-Engineered Vascular Graft-Past, Present, and Future. Tissue Eng. Part B Rev. 2016;22(1):68-100. https://doi.org/10.1089/ten.teb.2015.0100</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Pashneh-Tala S, MacNeil S, Claeyssens F. The Tissue-Engineered Vascular Graft-Past, Present, and Future. Tissue Eng Part B Rev. 2016;22(1):68-100. https://doi.org/10.1089/ten.teb.2015.0100</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit4"><label>4</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Ren X., Feng Y., Guo J., Wang H., Li Q., Yang J., Hao X., Lv J., Ma N., Li W. Surface modification and endothelialization of biomaterials as potential scaffolds for vascular tissue engineering applications. Chem. Soc. Rev. 2015;44(15):5680-5742. https://doi.org/10.1039/c4cs00483c</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Ren X, Feng Y, Guo J, Wang H, Li Q, Yang J, Hao X, Lv J, Ma N, Li W. Surface modification and endothelialization of biomaterials as potential scaffolds for vascular tissue engineering applications. Chem Soc Rev. 2015;44(15):5680-742. https://doi.org/10.1039/c4cs00483c</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit5"><label>5</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Антонова Л.В., Барбараш О.Л., Барбараш Л.С. Тканеинженерные конструкции для нужд сердечно-сосудистой хирургии: возможности персонификации и перспективы использования. Вестник Российской академии медицинских наук. 2023;78(2):141- 150. https://doi.org/10.15690/vramn7578</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Antonova LV, Barbarash OL, Barbarash LS. Tissue-Engineered Constructions for the Needs of Cardiovascular Surgery: Possibilities of Personalization and Prospects for Use (Problem Article). Annals of the Russian academy of medical sciences. 2023;78(2):141-150. (In Russ). https://doi.org/10.15690/vramn7578</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit6"><label>6</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Tan W., Boodagh P., Selvakumar P.P., Keyser S. Strategies to counteract adverse remodeling of vascular graft: A 3D view of current graft innovations. Front. Bioeng. Biotechnol. 2023;10:1097334. https://doi.org/10.3389/fbioe.2022.1097334</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Tan W, Boodagh P, Selvakumar PP, Keyser S. Strategies to counteract adverse remodeling of vascular graft: A 3D view of current graft innovations. Front Bioeng Biotechnol. 2023;10:1097334. https://doi.org/10.3389/fbioe.2022.1097334</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit7"><label>7</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Di Francesco D., Pigliafreddo A., Casarella S., Di Nunno L., Mantovani D., Boccafoschi F. Biological Materials for Tissue-Engineered Vascular Grafts: Overview of Recent Advancements. Biomolecules. 2023;13(9):1389. https://doi.org/10.3390/biom13091389</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Di Francesco D, Pigliafreddo A, Casarella S, Di Nunno L, Mantovani D, Boccafoschi F. Biological Materials for Tissue-Engineered Vascular Grafts: Overview of Recent Advancements. Biomolecules. 2023;13(9):1389. https://doi.org/10.3390/biom13091389</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit8"><label>8</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Antonova L.V., Sevostyanova V.V., Mironov A.V., Krivkina E.O., Velikanova E.A., Matveeva V.G., Glushkova T.V., Elgudin Ya.L., Barbarash L.S. In situ vascular tissue remodeling using biodegradable tubular scaffolds with incorporated growth factors and chemoattractant molecules. Комплексные проблемы сердечнососудистых заболеваний. 2018;7(2):25-36. (In Russ). https://doi.org/10.17802/2306-1278-2018-7-2-25-36</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Antonova LV, Sevostyanova VV, Mironov AV, Krivkina EO, Velikanova EA, Matveeva VG, Glushkova TV, Elgudin YaL, Barbarash LS. In situ vascular tissue remodeling using biodegradable tubular scaffolds with incorporated growth factors and chemoattractant molecules. Complex Issues of Cardiovascular Diseases. 2018;7(2):25-36. (In Russ). https://doi.org/10.17802/2306-1278-2018-7-2-25-36</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit9"><label>9</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Antonova L.V., Sevostianova V.V., Silnikov V.N., Krivkina E.O., Velikanova E.A., Mironov A.V., Shabaev A.R., Senokosova E.A., Khanova M.Yu., Glushkova T.V., Akentieva T.N., Sinitskaya A.V., Markova V.E., Shishkova D.K., Lobov A.A., Repkin E.A., Stepanov A.D., Kutikhin A.G., Barbarash L.S. Comparison of the patency and regenerative potential of bio-degradable vascular prostheses of different polymer composi-tions in an ovine model. Int. J. Mol. Sci. 2023;24(10):8540. https://doi.org/10.3390/ijms24108540</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Antonova LV, Sevostianova VV, Silnikov VN, Krivkina EO, Velikanova EA, Mironov AV, Shabaev AR, Senokosova EA, Khanova MYu, Glushkova TV, Akentieva TN, Sinitskaya AV, Markova VE, Shishkova DK, Lobov AA, Repkin EA, Stepanov AD, Kutikhin AG, Barbarash LS. Comparison of the patency and regenerative potential of bio-degradable vascular prostheses of different polymer compositions in an ovine model. Int J Mol Sci. 2023;24(10):8540. https://doi.org/10.3390/ijms24108540</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit10"><label>10</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Watanabe T., Sassi S., Ulziibayar A., Hama R., Kitsuka T., Shinoka T. The Application of Porous Scaffolds for Cardiovascular Tissues. Bioengineering (Basel). 2023;10(2):236. https://doi.org/10.3390/bioengineering10020236</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Watanabe T, Sassi S, Ulziibayar A, Hama R, Kitsuka T, Shinoka T. The Application of Porous Scaffolds for Cardiovascular Tissues. Bioengineering (Basel). 2023;10(2):236. https://doi.org/10.3390/bioengineering10020236.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit11"><label>11</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">ГОСТ ISO 10993-5-2011. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 5. Исследования на цитотоксичность: методы in vitro [Электронный ресурс]. М.: Стандартинформ, 2024. Ссылка активна на 15.04.2024. https://www.lamsystems-lto.ru/files/pdf/gost/10993-5-2011.pdf</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">GOST ISO 10993-5-2011. Medical devices. Biological evaluation of medical devices. Part 5. Tests for in vitro cytotoxicity [Electronic version]. Moscow : Standartinform; 2024. (In Russ). Available at: https://rostest.info/gost/001.011.100.020/gost-iso-10993-5-2011/. Accessed: 15.04.2024.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit12"><label>12</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Чудинов В.С., Кондюpина И.В., Шаpдаков И.Н., Cвиcтков А.Л., Оcоpгина И.В., Кондюpин А.В. Полиуретан для медицинского применения, модифицированный плазменно-ионной обработкой. Биофизика. 2018; 63(3):444-454.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Chudinov VS, Shardakov IN, Svistkov AL, Kondyurina IV, Osorgina IV, Kondyurin AV. Polyurethane modified with plasma-ion implantation for medical applications. Biophysics. 2018; 63(3):444-454 (In Russ).</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit13"><label>13</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Ferrari M., Cirisano F., Morán M.C. Mammalian Cell Behavior on Hydrophobic Substrates: Influence of Surface Properties. Colloids Interfaces. 2019;3(48). https://doi.org/10.3390/colloids3020048</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Ferrari M, Cirisano F, Morán MC. Mammalian Cell Behavior on Hydrophobic Substrates: Influence of Surface Properties. Colloids Interfaces. 2019;3(48). https://doi.org/10.3390/colloids3020048</mixed-citation></citation-alternatives></ref></ref-list><fn-group><fn fn-type="conflict"><p>The authors declare that there are no conflicts of interest present.</p></fn></fn-group></back></article>
