Цель. Изучить гистохимию и ультраструктуру желточных клеток, обеспечивающих развитие яиц возбудителя описторхоза. Материалы и методы. Материалом для работы служили трематоды Opisthorchis felineus, взятые при вскрытии кошек, спонтанно заражённых описторхозом. Гистохимические исследования проводили с помощью реакций: толуидиновый синий (при рН 4,2); бромфеноловый синий по Бонхегу и Кумасси, бриллиантовый синий G-250 на белки; проводили ферри-феррицианидный метод на SS- и SH-группы по Шевремону и Фредерику. Ставили реакцию по Фельгену на ДНК, ШИК-реакцию на гликоген и окрашивали Суданом чёрным-В на липидный компонент. Результаты изучали в световом микроскопе. Для электронной микроскопии свежий материал выдерживали 2 часа в глютаровом альдегиде на фосфатном буфере в соотношении 1:9 в течение 10 минут, затем оставляли в чистом фосфатном буфере на 5 минут, после чего фиксировали в 1% растворе тетраокиси осмия. Фиксатор готовили на 0,1М фосфатном буфере (рН 7,4). После дегидратации в серии спиртов восходящей концентрации кусочки заключили в аралгит. Срезы готовили на ультрамикротоме КВ-ОА. После контрастирования в 2% уранил-ацетате и цитрате свинца по Рейнольдсу срезы изучали в электронном микроскопе ЭМВ-100В. Результаты. Ультраструктура желточных клеток Opisthorchis felineus зависит от стадии вителлогенеза, в процессе которого секретируются вещества белково-липидного характера. В их состав входят основные белки, некоторые аминокислоты (аргинин, гистидин, лизин, фенилаланин, тирозин, триптофан), SS- и SH-группы, незначительное количество гликогеновых зерен и липоиды. Эти вещества участвуют в образовании желточных гранул и глобул разной величины, которые создают кластеры в расширенных каналах-цистернах эндоплазматической сети. Желточные глобулы необходимы для формирования оболочки яиц, выполняющей защитную функцию и обеспечивающей их сохранность во внешней среде. Заключение. При изучении ультраструктуры и гистохимии установлено, что желточные клетки находятся на разных стадиях развития и в процессе вителлогенеза продуцируют желточные гранулы из белково-липидного комплекса, обеспечивающие создание оболочки и формирование яиц Opisthorchis felineus.
Aim. To study histochemistry and ultrastructure of vitellocytes providing the development of Opisthorchis felineus eggs. Materials and Methods. Opisthorchis felineus eggs were collected from cats with opisthorchiasis. Tissue were examined utilizing toluidine blue and bromphenol blue for nuclei staining, and Coomassie brilliant blue G-250 for protein staining. We further conducted ferric ferricyanide test (Chevremont and Frederic) to identify sulfur-containing amino acids, Feulgen staining to detect DNA, periodic acid-Schiff staining for polysaccharides and mucosubstances, and Sudan Black B for lipids. Electron microscopic examination was carried out after ultrathin sectioning with the following staining with uranyl acetate and counterstaining with lead citrate. Results. Ultrastructure of Opisthorchis felineus vitellocytes was defined by the stage of vitellogenesis. Vitellocytes were positively stained for proteins, SS- and SH-containing amino acids, and also contained small amount of glycogen and lipids. These substances were involved in the formation of vitelline granules aggregating in clusters within the endoplasmic reticulum and representing precursors of vitelline membrane. Conclusion. At sequential stages of their development, vitellocytes produce protein- and lipid-rich granules that ultimately consitute vitelline membrane of Opisthorchis felineus eggs.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.