fcmedicineФундаментальная и клиническая медицинаFundamental and Clinical Medicine2500-07642542-0941КемГМУ10.23946/2500-0764-2024-9-3-74-85fcmedicine-903Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL RESEARCHВозможности иммуногистохимических методов для оценки токсичности и механизма действия соединений с предполагаемым противоопухолевым действием в ходе доклинического исследования. От теории к реальной практикеImmunohistochemistry for assessing toxicity and mechanism of action of anticancer drugs during preclinical trials. From theory to practicehttps://orcid.org/0000-0003-3104-827XДодоховаМ. А.DodokhovaM. A.

Додохова Маргарита Авдеевна, доктор медицинских наук, заведующая ЦНИЛ

344022, Россия, г. Ростов-на-Дону, Нахичеванский пер., д. 29

Prof. Margarita A. Dodokhova, MD, DSc, Professor, Department of Pathological Physiology, Head of the Central Research Laboratory

29, Nahichevansky Prospekt, Rostov-onDon, 344022

dodokhova@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8792-6911АкименкоМ. А.AkimenkoM. A.

Акименко Марина Анатольевна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры медицинской биологии и генетики

344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, д. 29

Dr. Marina А. Akimenko, MD, PhD, Assistant Professor, Department of Medical Biology and Genetics

29, Nahichevansky Prospekt, Rostov-on-Don, 344022

https://orcid.org/0000-0003-2976-0794ВороноваО. В.VoronovaO. V.

Воронова Ольга Владимировна, кандидат медицинских наук, главный врач

344015, г. Ростов-на-Дону, ул. Благодатная, д. 170А

Dr. Olga V. Voronova, MD, PhD, Chief Medical Officer

170A, Blagodatnaya Street, Rostov-on-Don, 344015

https://orcid.org/0000-0001-5123-5289Алхусейн-КулягиноваМ. С.Alkhusein-KulyaginovaM. S.

Алхусейн-Кулягинова Маргарита Стефановна, ассистент кафедры патологической физиологии

344022, г. Ростовна-Дону, пер. Нахичеванский, д. 29

Dr. Margarita S. Alkhusein-Kulyaginova, MD, Assistant Professor, Department of Pathophysiology

29, Nahichevansky Prospekt, Rostov-on-Don, 344022

https://orcid.org/0000-0003-0485-5869КорниенкоН. А.KornienkoN. A.

Корниенко Наталья Александровна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры нормальной анатомии

344022, г. Ростовна-Дону, пер. Нахичеванский, д. 29

Dr. Natalia A. Kornienko, MD, PhD, Associate Professor, Department of Normal Anatomy

29, Nahichevansky Prospekt, Rostov-on-Don, 344022

https://orcid.org/0000-0001-6023-8916ГулянМ. В.GulyanM. V.

Гулян Марина Владимировна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры патологической физиологии

344022, г. Ростовна-Дону, пер. Нахичеванский, д. 29

Dr. Marina V. Gulyan, MD, PhD, Associate Professor, Department of Pathophysiology

29, Nahichevansky Prospekt, Rostov-on-Don, 344022

https://orcid.org/0009-0000-9237-6512ГюльмамедовД. Н.GyulmamedovD. N.

Гюльмамедов Давид Натигович, лаборант кафедры патологической физиологии

344022, г. Ростовна-Дону, пер. Нахичеванский, д. 29

Mr. David N. Gyulmamedov, Laboratory Assistant, Department of Pathophysiology

29, Nahichevansky Prospekt, Rostov-on-Don, 344022

АлашеваМ.-М. Х.AlashevaM.-M. Kh.

Алашева Милана-Мариат Хайдаровна, лаборант кафедры патологической физиологии

344022, г. Ростовна-Дону, пер. Нахичеванский, д. 29

Mrs. Milana-Mariat Kh. Alasheva, Laboratory Assistant, Department of Pathophysiology

29, Nahichevansky Prospekt, Rostov-on-Don, 344022

https://orcid.org/0009-0003-3731-6746КазимагомедоваЭ. Ш.KazimagomedovaE. Sh.

Казимагомедова Эсмира Шихмагомедовна, лаборант кафедры патологической физиологии

344022, г. Ростовна-Дону, пер. Нахичеванский, д. 29

Mrs. Esmira Sh. Kazimagomedova, Laboratory Assistant, Department of Pathophysiology

29, Nahichevansky Prospekt, Rostov-on-Don, 344022

https://orcid.org/0000-0002-7824-3382ШпаковскийД. Б.ShpakovskyD. B.

Шпаковский Дмитрий Борисович, кандидат химических наук, старший научный сотрудник, научно-исследовательская  лаборатория биоэлементоорганической химии кафедры медицинскойхимии и тонкого органического синтеза

119991, г. Москва, Ленинские горы, 1, стр. 3

Dr. Dmitry B. Shpakovsky, PhD, Senior Researcher, Research Laboratory of the Bioelementoorganic Chemistry, Department of Medical Chemistryand Fine Organic Synthesis

1, b. 3, Leninskie Gory, Moscow, 119991

https://orcid.org/0000-0002-5489-3866МилаеваЕ. Р.MilaevaE. R.

Милаева Елена Рудольфовна, доктор химических наук, профессор, заведующая кафедрой медицинской химии и тонкого органического синтеза

119991, г. Москва, Ленинские горы, 1, стр. 3

Dr. Elena R. Milaeva, DSc, Professor, Head of the Department of Medical Chemistry and Fine Organic Synthesis

 1, b. 3, Leninskie Gory, Moscow, 119991

https://orcid.org/0000-0002-2796-9466КотиеваИ. М.KotievaI. M.

Котиева Инга Мовлиевна, доктор медицинских наук, профессор, проректор по научной работе, заведующая кафедрой патологической физиологии

344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, д. 29

Prof. Inga M. Kotieva, MD, DSc, Professor, Chief Scientific Officer, Chief of the Department of Pathophysiology

29, Nahichevansky Prospekt, Rostov-on-Don, 344022

ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияRostov State Medical UniversityRussian FederationГБУ Ростовской области «Патолого-анатомическое бюро»РоссияRegional Department of PathologyRussian FederationФГБОУ ВО «Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова»РоссияLomonosov Moscow State UniversityRussian Federation202427092024937485Copyright © Додохова М.А., Акименко М.А., Воронова О.В., Алхусейн-Кулягинова М.С., Корниенко Н.А., Гулян М.В., Гюльмамедов Д.Н., Алашева М.Х., Казимагомедова Э.Ш., Шпаковский Д.Б., Милаева Е.Р., Котиева И.М., 20242024Додохова М.А., Акименко М.А., Воронова О.В., Алхусейн-Кулягинова М.С., Корниенко Н.А., Гулян М.В., Гюльмамедов Д.Н., Алашева М.Х., Казимагомедова Э.Ш., Шпаковский Д.Б., Милаева Е.Р., Котиева И.М.Dodokhova M.A., Akimenko M.A., Voronova O.V., Alkhusein-Kulyaginova M.S., Kornienko N.A., Gulyan M.V., Gyulmamedov D.N., Alasheva M.K., Kazimagomedova E.S., Shpakovsky D.B., Milaeva E.R., Kotieva I.M.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://fcm.kemsmu.ru/jour/article/view/903Цель

Цель. Выявить наиболее целесообразные для углубленного изучения патогенетические механизмы реализации противоопухолевого и антиметастатического действия тестируемых гибридных оловоорганических соединений с помощью иммуногистохимического метода.

Материалы и методы

Материалы и методы. В качестве тестируемого соединения было исследована субстанция бис(3,5-ди-трет-бутил-4- гидроксифенилтиолат) диметилолова (лабораторный шифр Ме-3), относящаяся к классу гибридных оловоорганических соединений. Экспериментальная часть выполнена на 30 мышах линии C57Bl/6 (самки) с использованием универсальной модели перевиваемых опухолей со спонтанным метастазированием – меланомы В16. Через 48 часов после перевивки опухолевых клеток мышам-самкам линии С57Вl/6 Ме-3 вводили внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 10 дней в суммарной дозе (СД) 375 мг/кг. Для морфологического анализа был использован первичный опухолевый узел меланомы В16, подготовка тканей была проведена по стандартной схеме. Иммунофенотипирование образцов ткани меланомы В16 мышей, полученных в эксперименте, проводили с использованием первичных антител: Polyclonal Antibody to Transforming Growth Factor Beta 1 (TGFb1) (Elabscience, dilution of 1:100), Vascular Endothelial Growth Factor A (VEGFA) (Elabscience, dilution of 1:200), Polyclonal Antibody to Bcl2 Associated X Protein (Bcl2) (Elabscience, dilution of 1:100), Polyclonal Antibody to Cluster Of Differentiation 34 (CD34) Elabscience, dilution of 1:200).

Результаты

Результаты. В нашем исследовании под действием гибридного оловоорганического соединения (Ме-3) в опухолевой ткани активность иммуногистохимической реакции с антителами к TGF-β1 и Bcl-2 снижалась, модификация процесса образования патологических новых кровеносных сосудов и сосудоподобных структур из опухолевых клеток отмечалась только в метрономном режиме введения Ме-3 (десятикратно, в низкой дозировке).

Заключение

Заключение. По результатам поискового иммуногистохимического исследования ткани меланомы В16 мышей при введении гибридных оловоорганических соединений наиболее целесообразными для углубленного изучения были выбраны два патогенетических механизма реализации противоопухолевого и антиметастатического действия тестируемых соединений: апоптотический и антинеоангиогенетический. Для наиболее эффективного доклинического отбора новых перспективных соединений с предполагаемым противоопухолевым действием необходимо расширять границы применения специфических морфологических методов, в том числе и иммуногистохимических.

Aim

Aim. To identify the most suitable pathogenetic mechanisms for in-depth study of the antitumor and antimetastatic effects of tested hybrid organotin compounds using the immunohistochemical approach.

Materials and Methods

Materials and Methods. Here, we tested bis(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenylthiolate) dimethyltin (laboratory code Me-3), belonging to the class of hybrid organotin compounds, on 30 female C57Bl/6 mice using a universal model of transplantable tumors with spontaneous metastasis (B16 melanoma). 48 hours after tumor cell transplantation, we intraperitoneally administered Me-3 once daily to female C57Bl/6 mice for 10 days at a total dose (TD) of 375 mg/kg. For histological analysis, we used the primary tumor node of B16 melanoma. Immunophenotyping of B16 melanoma tissue samples was carried out using the polyclonal antibodies to transforming growth factor beta 1 (TGFβ-1), vascular endothelial growth factor A (VEGFA), Bcl2-associated X Protein (Bcl-2), cluster of differentiation 34 (CD34).

Results

Results. After the exposure to Me-3, we found a reduced immunohistochemical signal to TGF-β1 and Bcl-2 3 in the tumor tissue. Low doses of Me-3 have also impacted angiogenesis.

Conclusion

Conclusion. Me-3 has a pro-apoptotic and anti-angiogenetic effects on B16 melanoma cells in C57Bl/6 mice.

доклинические исследованияпротивоопухолевые лекарственные средстваиммуногистохимияморфологический методгибридные оловоорганические соединенияpreclinical studiesantitumor drugsimmunohistochemistryangiogenesishybrid organotin compoundsГрант РНФ 22-63-00016.Russian Science Foundation grant #22-63-00016.ReferencesGonzález-Ballesteros M.M., Mejía C., Ruiz-Azuara L. Metallodrugs: an approach against invasion and metastasis in cancer treatment. FEBS Open Bio. 2022;12(5):880−899. https://doi.org/10.1002/2211-5463.13381González-Ballesteros MM, Mejía C, Ruiz-Azuara L. Metallodrugs: an approach against invasion and metastasis in cancer treatment. FEBS Open Bio. 2022;12(5):880−899. https://doi.org/10.1002/2211-5463.13381Peña Q., Wang A., Zaremba O., Shi Y., Scheeren HW., Metselaar JM., Kiessling F., Pallares RM., Wuttke S., Lammers T. Metallodrugs in cancer nanomedicine. Chem. Soc. Rev. 2022;51(7):2544- 2582. https://doi.org/10.1039/d1cs00468aPeña Q, Wang A, Zaremba O, Shi Y, Scheeren HW, Metselaar JM, Kiessling F, Pallares RM, Wuttke S, Lammers T. Metallodrugs in cancer nanomedicine. Chem Soc Rev. 2022;51(7):2544−2582. https://doi.org/10.1039/d1cs00468aSyed Annuar S.N., Kamaludin N.F., Awang N., Chan K.M. Cellular basis of organotin(IV) derivatives as anticancer metallodrugs: A Review. Fron. Chem. 2021;9:657599. https://doi.org/10.3389/fchem.2021.657599Syed Annuar SN, Kamaludin NF, Awang N, Chan KM. Cellular basis of organotin(IV) derivatives as anticancer metallodrugs: A Review. Fron Chem. 2021;9:657599. https://doi.org/10.3389/fchem.2021.657599Milaeva E.R., Shpakovsky D.B., Gracheva Y.A., Antonenko T.A., Ksenofontova T.D., Nikitin E.A., Berseneva D.A. Novel selective anticancer agents based on sn and au complexes. Mini-review. Pure and Applied Chemistry. 2020;92(8):1201−1216. https://doi.org/10.1515/pac-2019-1209Milaeva ER, Shpakovsky DB, Gracheva YA, Antonenko TA, Ksenofontova TD, Nikitin EA, Berseneva DA. Novel selective anticancer agents based on sn and au complexes. Mini-review. Pure and Applied Chemistry. 2020;92(8):1201−1216. https://doi.org/10.1515/pac-2019-1209Милаева Е.Р., Додохова М.А., Шпаковский Д.Б., Антоненко Т.А., Сафроненко А.В., Котиева И.М., Комарова Е.Ф., Ганцгорн Е.В., Алхусейн-Кулягинова М.С. Механизмы цитотоксического действия оловоорганических соединений. Биомедицина. 2021;17(2):88−99. https://doi.org/10.33647/2074-5982-17-2-88-99Milaeva ER, Dodokhova MA, Shpakovsky DB, Antonenko TA, Safronenko A, Kotieva I.M, Komarova EF, Gantsgorn ЕV, Alkhuseyn-Kulyaginova MS. Mechanisms of the Cytotoxic Action of Organotin Compounds. Journal Biomed. 2021;17(2):88−99. (In Russ.). https://doi.org/10.33647/2074-5982-17-2-88-99Додохова М.А., Сафроненко А.В., Котиева И.М., Сухорукова Н.В., Ганцгорн Е.В., Алхусейн-Кулягинова М.С., Комарова Е.Ф., Шпаковский Д.Б., Милаева Е.Р. Оценка фармакотерапевтического потенциала оловоорганических соединений in vivo. Биофармацевтический журнал. 2021;13(3):30−34. https://doi.org/10.30906/2073-8099-2021-13-3-30-34Dodokhova MA, Safronenko AV, Kotieva IM, Sukhorukova NV, Gantsgorn EV, Alkhusein-Kulyaginova MS, Komarova EF, Shpakovsky DB, Milaeva ER. Pharmacotherapeutic potential’s evaluation of organotin compounds in vivo. Russian Journal of Biopharmaceuticals. 2021;13(3)30−34 (In Russ.). https://doi.org/10.30906/2073-8099-2021-13-3-30-34Додохова М.А., Сафроненко А.В., Котиева И.М., Комарова Е.Ф., Трепель В.Г., Алхусейн-Кулягинова М.С., Шпаковский Д.Б., Милаева Е.Р. Исследование острой пероральной токсичности оловоорганических соединений, содержащих фрагмент 2,6-ди-трет-бутилфенола. Уральский медицинский журнал. 2021;20(3):73-77. https://doi.org/10.52420/2071-5943-2021-20-3-73-77Dodokhova MA, Safronenko АV, Kotieva IM, Komarova EF, Trepel VG, Alkhuseyn-Kulyaginova MS, Shpakovskiy DB, Milaeva ER. Study of acute oral toxicity of organotin compounds containing a 2,6-di-tert-butylphenol fragment. Ural'skij medicinskij zhurnal. 2021;20(3):73−77. (In Russ.). https://doi.org/10.52420/2071-5943-2021-20-3-73-77Додохова М.А., Воронова О.В., Котиева И.М., Сафроненко А.В., Шлык С.В., Дроботя Н.В., Акименко М.А., Шпаковский Д.Б., Милаева Е.Р. Сравнительный анализ морфологических и биохимических изменений при однократном внутрижелудочном введении гибридных оловоорганических соединений. Сибирский журнал клинической и экспериментальной медицины. 2023;38(1):167-174. https://doi.org/10.29001/2073-8552-2023-38-1-167-174Dodokhova MA, Voronova OV, Kotieva IM, Safronenko AV, Shlyk SV, Drobotya NV, Akimenko MA, Shpakovsky DB, Milaeva ER. Comparative analysis of morphological and biochemical changes after a single intragastric administration of hybrid organotin compounds. The Siberian Journal of Clinical and Experimental Medicine. 2023;38(1):167−174 (In Russian.). https://doi.org/10.29001/2073-8552-2023-38-1-167-174Dodokhova M.A., Safronenko A.V., Kotieva I.M., Alkhuseyn-Kulyaginova M.S., Shpakovsky D.B., Milaeva E.R. Impact of organotin compounds on the growth of epidermoid Lewis carcinoma. Research Results in Pharmacology. 2021;7(4):81-88. https://doi.org/10.3897/rrpharmacology.7.71455Dodokhova MA, Safronenko AV, Kotieva IM, Alkhuseyn-Kulyaginova MS, Shpakovsky DB, Milaeva ER. Impact of organotin compounds on the growth of epidermoid Lewis carcinoma. Research Results in Pharmacology. 2021;7(4):81−88. https://doi.org/10.3897/rrpharmacology.7.71455Dodokhova M.A., Safronenko A.V., Kotieva I.M., Alkhuseyn-Kulyaginova M.S., Shpakovsky D.B., Milaeva E.R. Evaluation of the pharmacological activity of hybrid organotin compounds in a B16 melanoma model in the classical and metronomic administration modes. Research Results in Pharmacology. 2022;8(1):85-94.Dodokhova MA, Safronenko AV, Kotieva IM, Alkhuseyn-Kulyaginova MS, Shpakovsky DB, Milaeva ER. Evaluation of the pharmacological activity of hybrid organotin compounds in a B16 melanoma model in the classical and metronomic administration modes. Research Results in Pharmacology. 2022;8(1):85−94.Koh J., Kwak Y., Kim J., Kim W.H. High-Throughput Multiplex Immunohistochemical Imaging of the Tumor and Its Microenvironment. Cancer Res. Treat. 2020;52(1):98−108. https://doi.org/:10.4143/crt.2019.195Koh J, Kwak Y, Kim J, Kim WH. High-Throughput Multiplex Immunohistochemical Imaging of the Tumor and Its Microenvironment. Cancer Res. Treat. 2020;52(1):98−108. https://doi.org/:10.4143/crt.2019.195Workman S., Jabbour S.K., Deek M.P. A narrative review of genetic biomarkers in non-small cell lung cancer: an update and future perspectives. AME Med. J. 2023;8:6. https://doi.org/10.21037/amj2022-01Workman S, Jabbour SK, Deek MP. A narrative review of genetic biomarkers in non-small cell lung cancer: an update and future perspectives. AME Med. J. 2023;8:6. https://doi.org/10.21037/amj2022-01Kalra J., Baker J. Multiplex Immunohistochemistry for Mapping the Tumor Microenvironment. Methods Mol. Biol. 2017;1554:237−251. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-6759-9_17Kalra J, Baker J. Multiplex Immunohistochemistry for Mapping the Tumor Microenvironment. Methods Mol Biol. 2017;1554:237−251. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-6759-9_17Koh J., Kwak Y., Kim J., Kim W.H. High-Throughput Multiplex Immunohistochemical Imaging of the Tumor and Its Microenvironment. Cancer Res. Treat. 2020;52(1):98−108. https://doi.org/10.4143/crt.2019.195Koh J, Kwak Y, Kim J, Kim WH. High-Throughput Multiplex Immunohistochemical Imaging of the Tumor and Its Microenvironment. Cancer Res Treat. 2020;52(1):98−108. https://doi.org/10.4143/crt.2019.195Magaki S., Hojat S.A., Wei B., So A., Yong W.H. An Introduction to the Performance of Immunohistochemistry. Methods. Mol. Biol. 2019;1897:289−298. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-8935-5_25Magaki S, Hojat SA, Wei B, So A, Yong WH. An Introduction to the Performance of Immunohistochemistry. Methods Mol Biol. 2019;1897:289−298. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-8935-5_25Schildhaus H.U. Immunohistochemistry-based predictive biomarkers for lung cancer. Pathologe. 2020;41(1):21−31. https://doi.org/10.1007/s00292-020-00750-7Schildhaus HU. Immunohistochemistry-based predictive biomarkers for lung cancer. Pathologe. 2020;41(1):21−31. https://doi.org/10.1007/s00292-020-00750-7VanderLaan P.A., Rangachari D., Majid A., Parikh M.S., Gangadharan S.P., Kent M.S., McDonald D.C., Huberman M.S., Kobayashi S.S., Costa D.B. Tumor biomarker testing in non-small-cell lung cancer: A decade of change. Lung Cancer. 2018;116:90−95. https://doi.org/10.1016/j.lungcan.2018.01.002VanderLaan PA, Rangachari D, Majid A, Parikh MS, Gangadharan SP, Kent MS, McDonald DC, Huberman MS, Kobayashi SS, Costa DB. Tumor biomarker testing in non-small-cell lung cancer: A decade of change. Lung Cancer. 2018;116:90−95. https://doi.org/10.1016/j.lungcan.2018.01.002Sukswai N., Khoury J.D. Immunohistochemistry Innovations for Diagnosis and Tissue-Based Biomarker Detection. Curr. Hematol. Malig. Rep. 2019;14(5):368−375. https://doi.org/10.1007/s11899-019-00533-9Sukswai N, Khoury JD. Immunohistochemistry Innovations for Diagnosis and Tissue-Based Biomarker Detection. Curr Hematol Malig Rep. 2019;14(5):368−375. https://doi.org/10.1007/s11899-019-00533-9Villar V.H., Subotički T., Đikić D., Mitrović-Ajtić O., Simon F., Santibanez J.F. Transforming Growth Factor-β1 in Cancer Immunology: Opportunities for Immunotherapy. Adv. Exp. Med. Biol. 2023;1408:309−328. https://doi.org/10.1007/978-3-031-26163-3_17Villar VH, Subotički T, Đikić D, Mitrović-Ajtić O, Simon F, Santibanez JF. Transforming Growth Factor-β1 in Cancer Immunology: Opportunities for Immunotherapy. Adv Exp Med Biol. 2023;1408:309−328. https://doi.org/10.1007/978-3-031-26163-3_17Xue V.W., Chung J.Y., Córdoba C.A.G., Cheung A.H., Kang W., Lam E.W., Leung K.T., To K.F., Lan H.Y., Tang P.M. Transforming Growth Factor-β: A Multifunctional Regulator of Cancer Immunity. Cancers (Basel). 2020;12(11):3099. https://doi.org/10.3390/cancers12113099Xue VW, Chung JY, Córdoba CAG, Cheung AH, Kang W, Lam EW, Leung KT, To KF, Lan HY, Tang PM. Transforming Growth Factor-β: A Multifunctional Regulator of Cancer Immunity. Cancers (Basel). 2020;12(11):3099. https://doi.org/10.3390/cancers12113099Xiong H., Liu X., Xie Z., Zhu L., Lu H., Wang C., Yao J. Metabolic Symbiosis-Blocking Nano-Combination for Tumor Vascular Normalization Treatment. Adv. Healthc. Mater. 2022;11(17):e2102724. https://doi.org/10.1002/adhm.202102724Xiong H, Liu X, Xie Z, Zhu L, Lu H, Wang C, Yao J. Metabolic Symbiosis-Blocking Nano-Combination for Tumor Vascular Normalization Treatment. Adv Healthc Mater. 2022;11(17):e2102724. https://doi.org/10.1002/adhm.202102724.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.