ИССЛЕДОВАНИЕ НОРМАЛЬНОЙ И ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ МИКРОСКОПИЧЕСКОЙ АНАТОМИИ КРОВЕНОСНЫХ СОСУДОВ ПРИ ПОМОЩИ СКАНИРУЮЩЕЙ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ В ОБРАТНО-РАССЕЯННЫХ ЭЛЕКТРОНАХ

Цель. Изучить возможности применения оригинального метода длительной постфиксации тканей в тетраоксиде осмия и контрастирования уранилацетатом и цитратом свинца с последующей заливкой в эпоксидную смолу для исследования гистологических и гистопатологических особенностей кровеносных сосудов. Материалы и методы. В качестве эталонных объектов исследования были выбраны аорта крысы, полученная в результате каротид-ной эндартерэктомии пораженная атеросклерозом сонная артерия человека и полученный в результате тотальной хирургической коррекции тетрады Фалло стент. После суточной фиксации в 10% забуференном формалине сосуды были контрастированы 2% тетраоксидом осмия в течение 60 часов, дегидратированы посредством воздействия спиртов возрастающей концентрации (50, 60, 70, 80 и 95%-ный эта-нол, 99,7% изопропанол, ацетон), пропитаны смесью ацетона с эпоксидной смолой Epon-Araldite в соотношении 1:1 и заключены в вышеуказанную эпоксидную смолу с последующей шлифовкой и полировкой полимеризован-ных эпоксидных блоков. Контрастирование 2% уранилацетатом осуществляли во время проводки в 95% этаноле, контрастирование цитратом свинца по Рейнольдсу выполняли путем нанесения на поверхность шлифованного образца с последующей отмывкой. Далее проводилось напыление эпоксидных блоков углеродом и собственно визуализация образцов при помощи сканирующей электронной микроскопии в обратно-рассеянных электронах.Результаты. Вышеописанная методика позволила обеспечить сохранность гистоархитектоники (интиму, медию, адвентицию и периваскулярную жировую ткань) и визуализировать с увеличением до пяти тысяч раз все основные структуры внутри сосудов (эндотелиальные клетки, эластические волокна, слои гладкомышечных клеток, фибробласты, клетки периваскулярной жировой ткани, vasa vasorum, лимфоидные фолликулы). Кроме того, с ее помощью оказалось возможным дифференцировать даже малокалиберные vasa vasorum от лимфоидных фол-ликулов. Это существенно расширяет возможности визуализации в сравнении с классической заливкой в парафин, рутинным окрашиванием и световой микроскопией (позволяющей добиться увеличения не более чем в четыреста раз, что не позволяет провести количественный анализ vasa vasorum и лимфоидных фолликулов). Кроме того, в отличие от стандартного подхода, данная методика позволяет проводить полноценный анализ тканей, содержащих цельнометаллические имплантаты или массивные кальцификаты.Заключение. Описанная методика может быть предложена для апробации в функциональных исследованиях по оценке физиологической и патологической неоваскуляризации, а также активации воспаления в адвентиции и периваскулярной жировой ткани.

аорта, стенты, эпоксидная смола, vasa vasorum, неоваскуляризация, aorta, stents, epoxy resin, vasa vasorum, neovascularization

1. Timmermans FJ, Otto C. Contributed review: Review of integrated correlative light and electron microscopy. Rev Sci Instrum. 2015; 86 (1): 011501. doi: 10.1063/1.4905434

2. Combs CA, Shroff H. Fluorescence Microscopy: A Concise Guide to Current Imaging Methods. Curr Protoc Neurosci. 2017; 79: 2.1.1-2.1.25. doi: 10.1002/cpns.29

3. Ryan J, Gerhold AR, Boudreau V, Smith L, Maddox PS. Introduction to Modern Methods in Light Microscopy. Methods Mol Biol. 2017; 1563: 1-15. doi: 10.1007/978-1-4939-6810-7_1

4. Mukhamadiyarov RA, Sevostyanova VV, Shishkova DK, Nokhrin AV, Sidorova OD, Kutikhin AG. Grinding and polishing instead of sectioning for the tissue samples with a graft: Implications for light and electron microscopy. Micron. 2016; 85: 1-7. doi: 10.1016/j.micron.2016.03.005

5. Лотков А.И., Матвеева В.Г., Антонова Л.В., Кашин О.А., Кудряшов А.Н. Основные направления модификации поверхности металлических эндоваскулярных стентов в решении проблемы рестенозов (обзор 1 часть) // Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2017. Т. 6. № 1. С. 122-130). doi: 10.17802/2306-1278-2017-1-122-130

6. Лотков А.И., Матвеева В.Г., Антонова Л.В., Кашин О.А., Кудря-шов А.Н. Основные направления модификации поверхности металлических эндоваскулярных стентов в решении проблемы рестенозов (обзор 2 часть) // Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2017. Т. 6. № 3. С. 131-142). doi: 10.17802/2306-1278-2017-6-3-131-142

7. Pereira T, Betriu A, Alves R. Non-invasive imaging techniques and assessment of carotid vasa vasorum neovascularization: Promises and pitfalls. Trends Cardiovasc Med. 2019; 29 (2): 71-80. doi: 10.1016/j.tcm.2018.06.007

8. Шишкова Д.К., Великанова Е.А., Кривкина Е.О., Миронов А.В., Кудрявцева Ю.А., Кутихин А.Г. Токсическое действие кальций-фосфатных бионов на адвентицию брюшной аорты крыс // Атеросклероз и дислипидемии. 2018. № 3 (32). С. 37-43

9. Sander B, Golas MM. Visualization of bionanostructures using transmission electron microscopical techniques. Microsc Res Tech. 2011; 74 (7): 642-663. doi: 10.1002/jemt.20963

10. Jensen E. Technical review: colocalization of antibodies using confocal microscopy. Anat Rec (Hoboken). 2014; 297 (2): 183-187. doi: 10.1002/ar.22835

11. Galis ZS, Lessner SM. Will the real plaque vasculature please stand up? Why we need to distinguish the vasa plaquorum from the vasa vasorum. Trends Cardiovasc Med. 2009; 19 (3): 87-94. doi: 10.1016/j.tcm.2009.06.001

12. Akhavanpoor M, Wangler S, Gleissner CA, Korosoglou G, Katus HA, Erbel C. Adventitial inammation and its interaction with intimal atherosclerotic lesions. Front Physiol. 2014; 5: 296. doi: 10.3389/fphys.2014.00296

13. Nosalski R, Guzik TJ. Perivascular adipose tissue inflammation in vascular disease. Br J Pharmacol. 2017; 174 (20): 3496-3513. doi: 10.1111/bph.13705

14. National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th edition. Washington (DC): National Academies Press (US); 2011

15. Нохрин А.В., Тарасов Р.С., Мухамадияров Р.А., Барбараш Л.С. Этапный подход: стентирование выводного отдела правого желудочка с последующей радикальной коррекцией тетрады Фалло у маловесных детей - непосредственные и отдаленные результаты // Детские болезни сердца и сосудов. 2017. Т. 14. № 2. С. 90-100