Оптимизация окрашивания элементов системы кровообращения и гепатолиенальной системы гематоксилином и эозином

Цель. Оптимизировать протокол окрашивания гематоксилином и эозином для элементов системы кровообращения (миокард, аорта) и гепатолиенальной системы (печень, селезенка).

Материалы и методы. В качестве эталонных объектов исследования были выбраны сердце (желудочки), аорта (брюшной отдел), печень (правая доля) и селезенка (левая часть). После фиксации в 10% забуференном формалине производилась вырезка репрезентативных сегментов тканей с дальнейшим промыванием в проточной воде, обезвоживанием с использованием этанола возрастающей концентрации (70%, 80%, 95%) и изопропанола, пропитыванием и заключением в парафин и серийной резкой (5 мкм) замороженных парафиновых блоков на микротоме. При регрессивном окрашивании время инкубации в гематоксилине (Гарриса) составляло 5 или 10 минут, дифференцирующем растворе (1% HCl в 70% этаноле) – 2 или 10 секунд, 1% водно-спиртовом эозине – 1 или 2 минуты. При прогрессивном окрашивании время инкубации в гематоксилине (Карацци) и эозине было аналогичным, однако не требовалось применения дифференцирующего раствора.

Результаты. Окрашивание прогрессивным гематоксилином во всех исследованных тканях позволяло сохранить целостность ткани и ускорить протокол окрашивания по сравнению с регрессивным в силу отсутствия необходимости экспозиции в агрессивном кислотно-спиртовом дифференцирующем растворе. Наилучшим протоколом в случае как регрессивного, так и прогрессивного окрашивания для миокарда, аорты и печени было признано воздействие гематоксилина в течение 10 минут, а эозина – в течение 2 минут, при этом время воздействия дифференцирующего раствора при регрессивном окрашивании (2 или 10 секунд) определялось желаемым оттенком. В случае с селезенкой наилучшим протоколом было окрашивание гематоксилином в течение 5 минут и эозином в течение 2 минут, а при регрессивном окрашивании – воздействие дифференцирующего раствора в течение 10 секунд.

Заключение. Применение прогрессивного гематоксилина при окраске тканей миокарда, аорты, печени и селезенки гематоксилином и эозином предпочтительнее и проще в сравнении с регрессивным гематоксилином.

1. Avwioro G. Histochemical uses of haematoxylin. JPCS. 2011;1(5):24-34.

2. Fischer AH, Jacobson KA, Rose J, Zeller R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. CSH Protoc. 2008;2008:pdb.prot4986. DOI: 10.1101/pdb.prot4986

3. Titford M. The long history of hematoxylin. Biotech Histochem. 2005;80(2):73-78. DOI: 10.1080/10520290500138372

4. Chan JK. The wonderful colors of the hematoxylin-eosin stain in diagnostic surgical pathology. Int J Surg Pathol. 2014;22(1):12-32. DOI: 10.1177/1066896913517939

5. Senturk GE, Canillioglu YE. Which histochemical staining technique should I choose for biological specimens. In: Mendez-Vilas A, ed. Microscopy: advances in scientific research and education. Formatex Research Center. 2014:769775.

6. Коржевский Д.Э. Применение гематоксилина в гистологической технике. Морфология. 2007;132(6):77-81.

7. Морфологическая диагностика: подготовка материала дляморфологического исследования и электронной микроскопии: руководство. Под ред. Д.Э. Коржевского. СПб.: СпецЛит; 2013.

8. Bancroft JD, Layton C. The hematoxylins and eosin. In: Suvarna K, Layton C, Bancroft J, ed. Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques. 8th ed. Elsevier; 2019:126139.

9. Feldman AT, Wolfe D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods Mol Biol. 2014;1180:31-43. DOI: 10.1007/978-1-4939-1050-2_3

10. Коржевский Д.Э. Приготовление гематоксилина Гарриса без использования оксида ртути. Морфология. 2003;128(4):93-94.

11. Прокопьев Ю.А., Фоменко Д.В., Кизиченко Н.В., Кудрявцева Ю.А., Борисов В.В., Попова А.П., Михайлова Н.Н. Методические подходы к изучению антракосиликоза, как фактора риска морфологических нарушений сосудов. Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2015;4(3);23-27.

12. Li Y, Li N, Yu X, Huang K, Zheng T, Cheng X, Zeng S, Liu X. Hematoxylin and eosin staining of intact tissues via delipidation and ultrasound. Sci Rep. 2018;8(1):12259. DOI: 10.1038/s41598-018-30755-5

13. Turkki R, Linder N, Kovanen P, Pellinen T, Lundin J. Identification of immune cell infiltration in hematoxylin-eosin stained breast cancer samples: texture-based classification of tissue morphologies. Proc. SPIE. 2016;9791:979110. DOI: 10.1117/12.2217040

14. Martina JD, Simmons C, Jukic DM. High-definition hematoxylin and eosin staining in a transition to digital pathology. J Pathol Inform. 2011;2:45. DOI: 10.4103/21533539.86284

15. Zarella MD, Yeoh C, Breen DE, Garcia FU. An alternative reference space for H&E color normalization. PLoS One. 2017;12(3):e0174489. DOI: 10.1371/journal.pone.0174489