УЛЬТРАСТРУКТУРА И ГИСТОХИМИЯ ЖЕЛТОЧНЫХ КЛЕТОК, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИХ РАЗВИТИЕ ЯИЦ ВОЗБУДИТЕЛЯ ОПИСТОРХОЗА

Цель. Изучить гистохимию и ультраструктуру желточных клеток, обеспечивающих развитие яиц возбудителя описторхоза. Материалы и методы. Материалом для работы служили трематоды Opisthorchis felineus, взятые при вскрытии кошек, спонтанно заражённых описторхозом. Гистохимические исследования проводили с помощью реакций: толуидиновый синий (при рН 4,2); бромфеноловый синий по Бонхегу и Кумасси, бриллиантовый синий G-250 на белки; проводили ферри-феррицианидный метод на SS- и SH-группы по Шевремону и Фредерику. Ставили реакцию по Фельгену на ДНК, ШИК-реакцию на гликоген и окрашивали Суданом чёрным-В на липидный компонент. Результаты изучали в световом микроскопе. Для электронной микроскопии свежий материал выдерживали 2 часа в глютаровом альдегиде на фосфатном буфере в соотношении 1:9 в течение 10 минут, затем оставляли в чистом фосфатном буфере на 5 минут, после чего фиксировали в 1% растворе тетраокиси осмия. Фиксатор готовили на 0,1М фосфатном буфере (рН 7,4). После дегидратации в серии спиртов восходящей концентрации кусочки заключили в аралгит. Срезы готовили на ультрамикротоме КВ-ОА. После контрастирования в 2% уранил-ацетате и цитрате свинца по Рейнольдсу срезы изучали в электронном микроскопе ЭМВ-100В. Результаты. Ультраструктура желточных клеток Opisthorchis felineus зависит от стадии вителлогенеза, в процессе которого секретируются вещества белково-липидного характера. В их состав входят основные белки, некоторые аминокислоты (аргинин, гистидин, лизин, фенилаланин, тирозин, триптофан), SS- и SH-группы, незначительное количество гликогеновых зерен и липоиды. Эти вещества участвуют в образовании желточных гранул и глобул разной величины, которые создают кластеры в расширенных каналах-цистернах эндоплазматической сети. Желточные глобулы необходимы для формирования оболочки яиц, выполняющей защитную функцию и обеспечивающей их сохранность во внешней среде. Заключение. При изучении ультраструктуры и гистохимии установлено, что желточные клетки находятся на разных стадиях развития и в процессе вителлогенеза продуцируют желточные гранулы из белково-липидного комплекса, обеспечивающие создание оболочки и формирование яиц Opisthorchis felineus.

гистохимия, ультраструктура, желточные клетки, скорлуповые гранулы, Opisthorchis felineus, histochemistry, ultrastructure, vitellocytes, vitelline granules, vitellogenesis, Opisthorchis felineus

1. Гребенщиков В.М., Буданцов Д.А. Функциональная морфология желточников трематод // Российский паразитологический журнал. 2011. №2. С.6-9

2. Начева Л.В., Гребенщиков В.М. Морфофункциональные особенности желточников трематод подотряда Paramphistomatata Fischoider, 1904 // Российский паразитологический журнал. 2009. №2. С. 24-26

3. Wang J, Collins JJ 3rd. Identification of new markers for the Schistosoma mansoni vitelline lineage. Int J Parasitol. 2016; 46(7): 405-410.

4. Lu Z, Quack T, Hahnel S, Gelmedin V, Pouokam E, Diener M, et al. Isolation, enrichment and primary characterisation of vitelline cells from Schistosoma mansoni obtained by the organ isolation method. 2015; 45(9-10): 663-672.

5. Świderski Z, Bakhoum AJ, Montoliu I, Feliu C, Gibson DI, Miquel J. Ultrastructural study of vitellogenesis in Maritrema feliui (Digenea, Microphallidae). Parasitol Res. 2011; 109(6):1707-1714.

6. Greani S, Quilichini Y, Marchand B. Ultrastructural study of vitellogenesis and oogenesis of Crepidostomum metoecus (Digenea, Allocreadiidae), intestinal parasite of Salmo trutta (Pisces, Teleostei). Parasite. 2016; 23: 47.

7. Khampoosa P, Jones MK, Lovas EM, Srisawangwong T, Laha T, Piratae S, et al. Light and electron microscopy observations of embryogenesis and egg development in the human liver fluke, Opisthorchis viverrini (Platyhelminthes, Digenea). Parasitol Res. 2012; 110(2): 799-808.

8. Chaibangyang W, Geadkaew-Krenc A, Vichasri-Grams S, Tesana S, Grams R. Molecular and Biochemical Characterization of Opisthorchis viverrini Calreticulin. Korean J Parasitol. 2017; 55(6): 643-652.

9. Pakharukova MY, Shilov AG, Pirozhkova DS, Katokhin AV, Mordvinov VA. The first comprehensive study of praziquantel effects in vivo and in vitro on European liver fluke Opisthorchis felineus (Trematoda). Int J Antimicrob Agents. 2015; 46(1): 94-100.

10. Zhukova MV, Mordvinov VA, Kiseleva E. Ultrastructure of spermatozoa in the seminal receptacle of the liver fluke Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884). Parasitol Res. 2014; 113(3):1093-1101.

11. Pink M, Verma N, Rettenmeier AW, Schmitz-Spanke S. CBB staining protocol with higher sensitivity and mass spectrometric compatibility. Electrophoresis. 2010; 31(4): 593-598.

12. Welinder C, Ekblad L. Coomassie staining as loading control in Western blot analysis. J Proteome Res. 2011; 10(3): 1416-1419.

13. Brunelle E, Le AM, Huynh C, Wingfield K, Halámková L, Agudelo J, et al. Coomassie Brilliant Blue G-250 Dye: An Application for Forensic Fingerprint Analysis. Anal Chem. 2017; 89(7): 4314-4319.

14. Martinez-Sernândez V, Perteguer MJ, Mezo M, Gonzâlez-Warleta M, Gârate T, Valero MA, et al. Fasciola spp: Mapping of the MF6 epitope and antigeni canalysis of the MF6p/HDM family of heme-binding proteins. PLoS One 2017; 12(11): e0188520.

15. Начева Л.В., Гребенщиков В.М. Гистохимические исследования желточников у трематод // Труды общества зоологов Азербайджана. 2013. Т. 5. №1. С. 167-170

16. Глухов А.А., Фролов Р.Н., Алексеева Н.Т., Андреев А.А. Гистохимическая характеристика восстанови- тельных процессов при заживлении ран // Фундаментальные исследования. 2013. № 7.1. С. 55-60

17. Poddubnaya LG., Bruňanská M, Świderski Z, Gibson DI. Ultrastructure of the vitellarium in the digeneans Phyllodistomum angulatum (Plagiorchiida, Gorgoderidae) and Azygia lucii (Strigeida, Azygiidae). Acta Parasitol. 2012; 57(3): 235-246.

18. Poddubnaya LG, Zhokhov AE, Bruňanská M, Brázová T, Gibson DI. Ultrastructural characteristics of the vitellarium of Brandesia turgida (Brandes, 1888) (Digenea: Pleurogenidae) and an examination of the potential usefulness of such vitelline traits in digenean systematics. Helminthologia. 2013; 50(2): 119-126.

19. Greani S, Quilichini Y, Foata J, Greiman SE, Ndiaye PI, Tkach VV, et al. Vitellogenesis of the digenean Plagiorchis elegans (Rudolphi, 1802) (Plagiorchioidea, Plagiorchiidae). Parasitol Int. 2014; 63(3): 537-543.

20. Greani S, Quilichini Y, Foata J, Marchand B. Ultrastructural study of vitellogenesis of Aphallus tubarium (Rudolphi, 1819) Poche, 1926 (Digenea: Cryptogonimidae), an intestinal parasite of Dentex dentex (Pisces: Teleostei). J Parasitol. 2012; 98(5): 938-943.